本文建立了水产苗种中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿残留量的酶联免疫（ELISA）法。采用乙腈作为提取剂、超声提取替代涡旋振荡提取、纯水对正己烷进行饱和、红色记号笔对离心管进行标记等措施对前处理过程进行优化。结果表明：应用ELISA法测定孔雀石绿残留量，在0.050 0～4.50 ng·mL ^-1范围内呈现良好的线性关系，相关系数R2=0.997 0，方法检出限为0.075 0 μg·kg ^-1。在基质样品添加浓度为0.075 0、0.150、0.750 μg·kg ^-1的加标水平下，中国对虾、三疣梭子蟹、刺参、牙鲆等苗种的平均回收率为79.7%～104.5%，精密度（RSD）为3.3%～7.9%。试验结果表明，该法灵敏度高、特异性强、快速简便，适用于不同基质水产苗种中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿残留的快速批量检测，能及时为渔业质量安全监管部门的执法工作提供强有力的技术支撑。